Dekódování krevního testu RPGA

Krevní test RPGA je jednou z klasických diagnostických metod, které se používají již mnoho desetiletí, ale jsou stále aktuální. Proč se v současné době provádí RPGA? Proč je někdy upřednostňována před moderními metodami a kdy může běžný člověk čelit potřebě takového studia?

Nejmodernější metodou moderní laboratorní diagnostiky infekčních onemocnění je polymerázová řetězová reakce (PCR), která umožňuje určit v jakémkoli biologickém materiálu, od krve až po seškraby ze sliznic, zbytky genomu nebo jedinečný dědičný kód patogena. Druhou diagnostickou metodou je stanovení imunoglobulinů třídy M a G v krvi pacienta, které indikují vývoj specifické imunitní odpovědi.

Co je RPHA v krevním testu?

Tato výzkumná metoda (pasivní hemaglutinační reakce, PHAR) má také druhý název: nepřímá hemaglutinační reakce (IHR). A v praxi se můžete setkat jak se zkratkami RPGA, tak i RNGA. Co je to za analýzu? Vyžaduje centrifugované krevní sérum pacienta, které je kombinováno se speciálním diagnostickým činidlem. Klasicky se nazývá “erytrocytární antigen diagnosticum”. Po mnoho let se k jeho výrobě používaly červené krvinky neboli erytrocyty. Ale to bylo poměrně dávno a dnes se již nepoužívá biologický materiál a místo něj se používají mikroskopické latexové částice.

Na tyto částice jsou speciální technologií aplikovány antigeny charakteristické pro dané infekční agens, které jsou jeho „vizitkou“. Výsledkem je množství částic, na jejichž povrchu jsou adsorbovány aktivní molekuly antigenu a jsou pevně vázány na nosič.

Pokud pacientovo krevní sérum obsahuje protilátky produkované proti danému patogenu, pak jsou tyto latexové částice nebo erytrocyty slepeny dohromady protilátkami a dochází k jejich vysrážení, což se nazývá aglutinace (v překladu „slepení“). Tato reakce se provádí ve speciálních tabletách, které jsou vyrobeny z plastu a jsou určeny pro malé objemy. Dříve se analýza krve na RPGA prováděla pomocí sady běžných zkumavek. Obsahovaly krev pacienta v různých ředěních, ke kterým se přidávalo diagnosticum.

V některých případech se používá zrcadlová metoda, kdy diagnostika neobsahuje antigeny, ale protilátky. Tato metoda (RONGA neboli reverzní hemaglutinace) se používá k vyhledávání infekcí, při kterých toxiny cirkulují v krvi, jako je botulismus. V tomto případě, pokud má pacient v krvi botulotoxin, váže se na specifické antitoxické protilátky diagnostiky a je pozorována i aglutinační reakce, kterou lze stanovit v závislosti na ředění krevního séra.

Interpretace je založena na samotné aglutinaci a maximálním ředění krevního séra, při kterém ji lze ještě spolehlivě stanovit. Čím více je krev naředěná, ve které ještě dochází k aglutinaci, tím více protilátek je přítomno v těle pacienta a tím vyšší je specifická intenzita imunity při klasickém provedení této reakce. Nejčastěji používaná ředění jsou od 1:20 do 1:160 a vyšší. V současné době se pro primární diagnostiku syfilis nejčastěji používá nepřímá RNGA.

RPGA pro syfilis

Krevní test RPGA – co je to pro syfilis? Jedná se o provedení reakce v její klasické podobě, kdy jsou v krevním séru pacienta detekovány cirkulující protilátky proti původci syfilis. Tato metoda je levná, rychlá a umožňuje primární využití biologického materiálu pro screening této infekce, pro vyšetření dárců, kteří darují krev, a pro kontakty, které byly v úzkém kontaktu s pacienty.

RPGA pro syfilis je tedy metodou primární nespecifické laboratorní diagnostiky. To však neznamená, že pokud jsou takové protilátky detekovány, lze tuto analýzu považovat za nespolehlivou. Detekce protilátek proti světlé spirochétě je základem pro laboratorní diagnostiku syfilis a její potvrzení. A pasivní hemaglutinační reakce souvisí se specifickými nebo treponemálními testy, protože používá „skutečné“ syfilitické antigeny.

Po přidání krevního séra pacienta se syfilidou do specifického diagnostického roztoku dochází k hemaglutinaci. Tyto cirkulující protilátky v krvi se mohou objevit již 2 týdny po infekci. V tomto případě mluvíme o protilátkách „rychlé odezvy“, neboli imunoglobuliny třídy M. Po měsíci se doplní o specifické imunoglobuliny třídy G. Tato reakce tedy na počátku onemocnění určí pouze jeden typ protilátek, které indikují akutní infekci, a v sekundárním a terciárním období syfilis „chytí“ protilátky třídy G, kterých se v krvi hromadí poměrně dost. To je důvod, proč je citlivost této reakce na počátku onemocnění poněkud nižší, a pokud je člověk nemocný syfilidou několik let, pak se její citlivost blíží 100% oproti 86% v případě primární, čerstvé a nedávné syfilis.

Tato reakce je vysoce specifická a lze ji použít k potvrzení nebo vyvrácení primární diagnózy, která byla stanovena pomocí netreponemového testu. Mezi takové netreponemální testy patří RW nebo známá Wassermanova reakce. Při jeho provádění se jako antigen používá kardiolipinový antigen, který nemá žádný vztah k patogenu. Svou strukturou je velmi podobný syfilitickému testu, ale přesto se od něj poněkud liší, a proto jsou u tohoto typu výzkumu možné falešně pozitivní reakce.

RPGA jako metoda opětovného potvrzení

Pokud tedy Wassermanova reakce pacienta vykazuje pozitivní hodnotu, pak musí být provedena pasivní hemaglutinační reakce k potvrzení nebo vyvrácení výsledků RW. Specifičnost RPGA se pohybuje od 96 do 100 %. I u latentní syfilis bez jakýchkoli příznaků dokáže s téměř 100% pravděpodobností stanovit diagnózu.

Jelikož pravidla pro diagnostiku syfilis nutně vyžadují opětovné potvrzení primární diagnózy jinou metodou, pak je-li primární diagnostickou metodou samotné RPGA, musí být i přes vysokou citlivost znovu potvrzeno, ale pouze jinou metodou. A pak se používá také treponemální test, ale pouze jiný, například je nutné nové hodnoty dešifrovat pomocí metody ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).

Význam v nejranějších fázích a během rekonvalescence

Vzhledem k tomu, že protilátky patřící do třídy imunoglobulinů G zůstávají v krevním séru zpravidla po celý život i po aktivní a úspěšné léčbě syfilis s následným uzdravením, zůstávají tyto protilátky pozitivní. Pouze při podezření na syfilis a její léčbě ve „velmi časných stádiích“, několik dní po infekci, ve stádiu tvorby tvrdého chancre a regionální lymfadenitidy, může být RPGA negativní.

Skutečnost, že sekundární i terciární syfilis bude mít stejně pozitivní RPGA, znamená, že takovou studii nelze použít pro diferenciální diagnostiku stadií onemocnění. Je také nemožné posoudit účinnost léčby pomocí RPGA, protože protilátky budou stále cirkulovat v krvi. Účinnost terapie by měla být hodnocena pomocí dalších laboratorních testů. Zvláště vysoké četnosti a významné zředění krevního séra pacienta během RPGA se vyskytují u sekundární syfilis, stejně jako u časné a latentní formy tohoto onemocnění.

O falešně pozitivních hodnotách

Navzdory vysoké citlivosti a specifičnosti tohoto testu jsou však při provádění RPGA pro syfilis možné také falešně pozitivní hodnoty. Vyskytují se zřídka, ne ve více než 2,6 % případů, a objevují se, když v krvi pacienta kolují protilátky, které jsou velmi podobné syfilitickým protilátkám, ale nejsou jimi. Mohou to být autoprotilátky a nejčastěji taková „překvapení“ vyvolává systémový lupus erythematodes.

Také onemocnění, která jsou způsobena jinými zástupci treponema nebo spirochet, mohou vést k falešně pozitivním hodnotám, například lymská borelióza, kterou způsobuje „blízký příbuzný“ syfilis, Borrelia burgdorferi. O diagnóze boreliózy neboli klíšťové boreliózy si můžete přečíst zde. V některých případech jsou takové deformace způsobeny onkologickou patologií, těhotenstvím a dokonce pomalým akutním infarktem myokardu. V druhém případě se do krevního řečiště dostávají částice nekrotického srdečního svalu, které jsou strukturou podobné kardiolipinovému antigenu, který se používá k provádění Wassermanovy reakce a je extrahován ze srdce dobytka.

Falešně pozitivní výsledky mohou být způsobeny i případy nitrožilní drogové závislosti, HIV infekce a virové hepatitidy B a C, leptospirózy a recidivující horečky, stejně jako onemocnění, která se vyskytují v horkých zemích a jsou způsobena treponémami – pinta, yaws, bejel. Ve vzácných případech mohou pacienti s nízkou imunitou zaznamenat aktivaci treponem, což jsou saprofyty a žijí v dutině ústní. Také tuberkulóza a infekční mononukleóza mohou být příčinou takových reakcí, jako v případě rozsáhlých polytraumat a mnohočetných zlomenin.

Takové falešně pozitivní reakce je potřeba po nějaké době překontrolovat, obvykle do šesti měsíců vymizí, např. po vyřešení těhotenství nebo na delší dobu.

Příprava a indikace pro RPGA

Na rozbor není potřeba žádná příprava, jedinou výjimkou jsou kuřáci. Poslední cigareta by se měla vykouřit nejdříve 30 minut před darováním krve a v tento den je lepší s kouřením přestat úplně. Venózní krev se odebírá z kubitální žíly a tato studie je indikována pro čtyři skupiny pacientů:

osoby, které mají příznaky a známky syfilis (patří mezi ně pravděpodobný chancre, zvětšení regionálních tříselných lymfatických uzlin, nepochopitelná kožní vyrážka na pozadí podezřelé anamnézy, malátná meningitida, difuzní alopecie, příznaky syfilitické leukodermie ve druhém období nebo podezření na pokročilou tvorbu jizev, terapií dásní;
osoby v sexuálním a domácím kontaktu s pacienty;
dárci;
registrace zdravotního průkazu, preventivní lékařské prohlídky, plánovaná hospitalizace ve zdravotnickém zařízení.

Pátou kategorií jedinců jsou ti pacienti, kteří měli pozitivní reakci na syfilis získanou jinými diagnostickými metodami, nejčastěji Wassermanovou reakcí.

Interpretace výsledků RPGA pro syfilis

Normálně by RPHA měla být negativní, to znamená, že by u pacienta za žádných podmínek nemělo dojít k hemaglutinaci. Pokud jsou výsledky pozitivní, jedná se o různé formy syfilis, včetně vrozených. Všechny ostatní reakce jsou falešně pozitivní a již byly diskutovány výše. Pouze ve vzácných případech může negativní reakce RPGA na syfilis naznačovat, že test byl proveden příliš brzy v přítomnosti infekce, kdy ještě nebyly vytvořeny protilátky, tedy až 6 týdnů po infekci.

Krevní test na syfilis je studie, která vám umožní identifikovat patogen pohlavně přenosné choroby – bledý treponema (Treponema pallidum), přesněji jeho DNA nebo protilátky proti němu v těle. Je to jediná metoda diagnostiky tohoto pohlavního onemocnění, které postihuje mnoho vnitřních orgánů, nejen reprodukční.

Jaké testy existují na syfilis?

Laboratorní metody diagnostiky syfilis mohou být přímé, umožňující detekci patogenu nebo jeho DNA, stejně jako nepřímé, vykazující protilátky proti treponemu (sérologické studie).

Algoritmus pro laboratorní diagnostiku syfilis

Existuje několik typů krevních testů na syfilis. Lze je rozdělit do 2 skupin.

Treponemální (TT) nebo specifické

Vykazují protilátky proti patogenu. Při jejich vedení se používá antigen treponemového původu. Může to být samotný světlý treponema nebo rekombinantní proteiny.

Jejich výhodou je vysoká senzitivita a specificita, takže TT lze využít k objasnění výsledků NTT. Pro jejich vysokou spolehlivost se treponemální testy používají v časných stádiích onemocnění, kdy jsou netreponemální testy negativní. Ale je vhodné je použít při podezření na sekundární a latentní syfilis. V tomto případě jejich spolehlivost dosahuje 98-100%. Pokud mluvíme o primární syfilis, pak se citlivost sníží na 76-86%. Optimální možností je NTT.

Mezi nevýhody treponemových testů patří také technická náročnost jejich provedení. Výzkumný proces je pracný, proto se NTT často používá pro primární diagnostiku.

TT dokáže detekovat dva typy protilátek:

IgM – jsou vyráběny jako první, proto jsou určeny pro včasnou diagnostiku syfilis. Objevují se v krvi pacienta na konci druhého týdne po infekci a zmizí po 1-1,5 roce, pokud není léčba;
IgG – lze zjistit 3-4 týdny po infekci. Jejich koncentrace se postupně zvyšuje, vrchol je pozorován po 1,5 měsíci. Mohou přetrvávat po dlouhou dobu, dokonce po celý život.

TT testy, které mohou detekovat syfilis, zahrnují:

ELISA – enzymatická imunoanalýza;
RIF – imunofluorescenční nebo sérologická reakce;
RW (RW) – Wassermanova reakce;
RPGA (TPHA, TPPA) – pasivní hemaglutinační reakce;
IHL – imunochemiluminiscenční test, což je přesnější verze ELISA;
RIBT (RIT) – reakce imobilizace bledých treponémů.

RPGA

Krevní test RPGA je vysoce citlivý bez ohledu na stadium syfilis. Jeho specificita dosahuje 96–100 %. Podstatou studie je přidání činidla RPGA do krevního séra. V přítomnosti protilátek se červené krvinky slepí a vysrážejí.

Výsledky jsou prezentovány jako názvy. Významné zvýšení indikuje infekci, protože výška titru určuje aktivitu infekce.

EMF nebo Wassermanova reakce (RW)

Jde o nejznámější z nespecifických metod diagnostiky syfilis, která postupně nahrazuje RMP.

Wassermanova reakce (RW) – co je to za test? RW krevní test je sérologický test, který umožňuje detekci protilátek proti Treponema pallidum. Použití RV navrhl německý imunolog August Wasserman na začátku 20. století.

Doporučuje se provést krevní test na Wassermanovu reakci 5-6 týdnů po sexuálním kontaktu s infikovaným partnerem. Předtím budou výsledky testu negativní, i když došlo k infekci.

Výhodou rychlé diagnostiky syfilis (EDS) je jednoduchost provedení, nevýhodou nízká specificita. Vzhledem k vysoké pravděpodobnosti falešně pozitivních výsledků je RW často preferována před RMP nebo RPR.

Test ELISA na syfilis

Jde o vysoce citlivou (citlivost až 99 %) metodu pro detekci infekce syfilis v časných stádiích. Pozitivní výsledek lze získat 4-6 týdnů po infekci. V případě zánětlivých procesů v těle nebo metabolických poruch může být reakce falešně pozitivní.

Netreponemální (NTT)

Ukažte protilátky (reaginy) vytvořené proti kardiolipin – součást patogenní membrány, která je přítomna v krvi pacientů se syfilis. Patří sem:

RMP – mikroprecipitační reakce (MPR);
RPR – rychlý plazmatický reagin test;
VDRL – kvalitativní analýza na přítomnost protilátek proti kardiolipinu.

Navzdory nízké ceně, jednoduchosti a vysoké rychlosti provádění jsou NTT specifické a citlivé. Jejich nevýhodou je, že protilátky proti syfilis se mohou v těle objevit na pozadí akutních nebo chronických onemocnění doprovázených buněčnou smrtí, a proto může být výsledek falešně pozitivní. I když k tomu dochází v 1-3% případů.

RPR

Syphilis RPR, antikardiolipinový nebo nontreponemální test je vylepšeným analogem Wassermanovy reakce (RW) a modifikací VDRL testu. Ukazuje protilátky třídy IgG a IgM, které cirkulují v krvi 70-80 % pacientů s primární syfilis a 100 % pacientů se sekundární nebo latentní formou. Je nejcitlivější ze všech NTT.

Pozitivní PRP reakce je možná 3-5 týdnů po infekci. Postupem času titry klesají, stejně jako spolehlivost testu.

Krevní test RMP

co to je? Krevní test RMP je screeningový test na syfilis. Vykazuje protilátky třídy G a M proti kardiolipinům a vyznačuje se informativností a rychlou rychlostí získávání výsledků. Princip jeho implementace je jednoduchý. Pokud jsou v krvi protilátky, pak v důsledku reakce vypadávají bílé vločky.

Citlivost RMP závisí na stadiu syfilis:

primární – od 81 %;
sekundární a latentní – 94-99%.

Indikace

Syfilis – je onemocnění, které postihuje sliznice, kůži, vnitřní orgány a pohybový aparát. Přenáší se sexuálně, z nemocné matky na dítě, krví, slinami, spermatem a také syfilitickými vyrážkami na kůži.

Test na syfilis předepisuje gynekolog, urolog, neonatolog, dermatovenerolog nebo specialista na infekční onemocnění k potvrzení přítomnosti nebo nepřítomnosti patogenu v těle v následujících případech:

screeningové vyšetření dárců krve nebo orgánů;
těhotenství (test je předepsán při registraci a ve třetím trimestru);
narození dítěte z infikované matky;
nechráněný pohlavní styk s partnerem, který měl známky syfilis;
vznik vředy v ústech nebo na genitáliích, vyrážka na kůži nebo sliznici, zvětšené lymfatické uzliny, bolest v krku, zvýšená tělesná teplota;
posouzení účinnosti léčby (používá se NTT, častěji RMP, jelikož výsledky TT po syfilis zůstávají dlouhodobě pozitivní).

Vzhledem k tomu, že nemoc může být přenášena kontaktem a domácími prostředky, měli by lidé, jejichž povolání je spojeno s rizikem infekce, pravidelně podstupovat vyšetření. Jsou to zdravotníci, kosmetologové a kadeřníci. Předepisuje se také při lékařské prohlídce lidem, kteří pracují v pohostinství a přicházejí do styku s dětmi.

Kontraindikace

Studie je bezpečná i pro novorozence a zahrnuje odběr žilní krve, takže její provedení nemá žádné kontraindikace.

Abyste se vyhnuli falešně pozitivnímu výsledku, neměli byste darovat krev k analýze, pokud máte horečku nebo bezprostředně po infekčním onemocnění, nebo po rentgenovém nebo fyzikálním vyšetření.

Trénink

Krevní testy se provádějí nalačno, den předem byste se měli vyvarovat přejídání. 12 hodin před vyšetřením nesmíte pít alkohol, XNUMX hodin před vyšetřením jíst, užívat léky a kouřit. Můžete pít pouze vodu.
Studie se provádí před zahájením antibakteriální terapie.

Jak se nechat vyšetřit na syfilis?

K provedení testu budete potřebovat 5-10 ml žilní krve. Technika odběru se neliší od standardního odběru žilní krve z kubitální žíly pro jiné studie.

Existují 2 algoritmy pro provádění vyšetření:

Tradiční. Pro primární diagnostiku syfilis se používá RMP a jeho modifikace. Pokud je výsledek negativní, pak při podezření na infekci lze test zopakovat za 2-3 týdny. Pokud je výsledek pozitivní, je předepsán jakýkoli potvrzující test TSH. Typicky je to RPGA. Pozitivní výsledek znamená syfilis, negativní výsledek znamená falešně pozitivní hodnoty RMP.
Reverzibilní. Od tradičního se liší tím, že se nejprve používá TT, častěji ELISA. Pokud je výsledek negativní, studie končí. Při epidemiologických indikacích lze opakovat po 2-3 týdnech. Pokud je výsledek pozitivní, pak se provede NTT ke stanovení titru protilátek. Pokud je získána záporná hodnota, je dodatečně použita další metoda NTT, pokud je získána pozitivní hodnota, je stanovena diagnóza syfilis.

Po léčbě syfilis je pacient po roce vyřazen z evidence, pokud jsou výsledky kontrolního vyšetření negativní.

Jak dlouho trvá test na syfilis?

Standardní doba obratu je 1 pracovní den, nezahrnuje den přijetí krve. Pokud je laboratoř silně zatížena, studie může trvat 2–4 dny.

Wassermanova reakce (RW) je provedena během 2 dnů. Urgentní výsledky lze poskytnout za 1-1,5 hodiny, ale za příplatek.

Dekódování analýzy na syfilis

Výsledky analýzy mohou být pozitivní, negativní nebo falešně pozitivní. Falešné hodnoty lze získat v následujících případech:

autoimunitní onemocnění;
krevní onemocnění, včetně rakoviny;
zhoubných nádorů;
virová hepatitida;
HIV infekce;
tuberkulóza, malárie a další infekční onemocnění;
intravenózní podávání léků;
postvakcinační reakce;
věk pacienta je více než 80 let;
těhotenství.

Pokud existuje možnost falešně pozitivního výsledku, je třeba analýzu opakovat.

Pozitivní výsledek ukazuje na infekci syfilis – získanou nebo vrozenou.

Pokud je hodnota negativní, existují dvě možné možnosti: patogen chybí nebo k infekci došlo nedávno. V tomto ohledu, aby byla diagnóza spolehlivá, se studie opakuje.

Záporný	Pozitivní
Neexistuje žádná syfilis	Primární, sekundární nebo latentní syfilis
Prvních 2-6 týdnů po infekci

Studie neslouží ke sledování účinnosti léčby. Pro diferenciální diagnostiku syfilis od jiných treponematóz jsou nutné další metody.

RPR

Záporný	Pozitivní
Neexistuje žádná syfilis	Syfilis je přítomen
Onemocnění je v raném stádiu, od nákazy neuplynulo 3-5 týdnů, takže protilátky nejsou vytvořeny	Falešně pozitivní výsledek – nízký titr protilátek
Sekundární syfilis, kdy titry začínají klesat
Falešně negativní výsledek – příliš vysoký titr (velké množství protilátek)

Po léčbě negativní výsledek nebo pokles titrů 4krát nebo více značí zotavení.

RMP

Pozitivní výsledek znamená infekci. Chcete-li potvrdit nepřítomnost syfilis, musíte získat negativní výsledek dvakrát. Opakovaná studie se provádí po 1-2 měsících.

ELISA

Záporný	Pozitivní
Žádné protilátky, žádná syfilis	Pacient je nemocný
Onemocnění je v raném stádiu, od nákazy neuplynulo mnoho času	Falešně pozitivní výsledek – nízký titr protilátek
Chronická infekce v pozdní fázi

Wassermanova reakce (RW)

Záporný	Pochybné (+) nebo slabě pozitivní (++)	Silně pozitivní (+++)
Žádné protilátky, žádná syfilis	Pravděpodobnost nákazy je 50:50	Pacient je nemocný
Pravděpodobnost primární nebo terciární syfilis

Recenze

Na základě recenzí je nejpřesnější test RPR, i když RMP je předepisován častěji. Pozitivní výsledek se obvykle získá za přítomnosti klinických příznaků.

Cena testu na syfilis

Náklady na studii závisí na použité metodě, v průměru PRP a RPGA jsou asi 500 rublů, RMP je asi 200 rublů.

Některé laboratoře vyžadují samostatný poplatek za odběr žilní krve. Krev na vyšetření lze darovat v soukromé laboratoři nebo na klinice. Na doporučení lékaře lze test provést zdarma ve státní nemocnici.